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    Exposure of tryptophanyl residues inα-lactalbumin and lysozyme
    (1986) Edwards M., Ana M.; Silva S., E.
    The effect of iodide ion on the tryptophyl fluorescence of the homologous proteins lysozyme and?-lactalbumin in their native form, as well as in their modified structures and in fragments from these proteins was studied. By assessing the contribution to the total fluorescence of the exposed and buried Trp residues, and of the respective fluorescence quantum yields, the quantization of the number of Trp exposed to the solvent for all the species studied was possible. Both native proteins show an important increase in the number of Trp residues exposed to the solvent when treated with denaturing agents. The peptides L-II (aa 13-105) and?-I (aa 1-90) from lysozyme and?-lactalbumin, respectively, showed Trp residues with different degree of exposure, whereas the smaller fragments, L-III (aa 106-129) and?-II (aa 91 123), had all their Trp residues exposed to the solvent.
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    Mecanismos de muerte celular inducidos por acción de la luz visible y fotosensibilizadores flavínicos en disolución e incorporados en nanopartículas sililadas para aplicación en terapia fotodinámica
    (2017) Muñoz Figueroa, Marcelo Alejandro; Edwards M., Ana M.; Pontificia Universidad Católica de Chile. Facultad de Química
    La terapia fotodinámica (PDT) se ha convertido en una alternativa terapéutica eficiente frente a los tratamientos convencionales para el cáncer. Requiere el uso de un sensibilizador fotoquímico y luz visible para inducir muerte celular pese a que los mecanismos por los cuales se induce una muerte celular programada son multifactoriales, siendo la localización intracelular del fotosensibilizador una característica esencial. La riboflavina es un sensibilizador fotoquímico endógeno, siendo a la vez un compuesto que está presente en todos los organismos aeróbicos como precursor de los cofactores de todas las flavoenzimas conocidas. Para esta función biológica se requiere cantidades catalíticas del compuesto, las que son insuficientes para provocar los efectos requeridos en terapia fotodinámica. Para aumentar la incorporación a sistemas biológicos en nuestro laboratorio se ha esterificado los cuatro grupos hidroxilo de la cadena ribitil y se ha obtenido derivados hidrofóbicos que mantienen las propiedades fotofísicas y fotoquímicas del fotosensibilizador. En esta tesis, he estudiado los mecanismos de muerte celular inducidos por acción de la luz visible y fotosensibilizadores flavínicos en células humanas de leucemia HL-60, y en células de carcinoma de útero HeLa, que crecen adheridas al sustrato formando una mono capa. Se demostró que la acción conjunta de la luz visible y fotosensibilizadores flavínicos induce muerte celular programada por apoptosis y también por autofagia, utilizando microscopía electrónica de transmisión, citometría de flujo, microscopía de fluorescencia utilizando marcadores de lisosomas, en conjunto con inhibidores de autofagia. Estos mecanismos presentan la ventaja de no provocar inflamación lo que disminuye los efectos secundarios de una terapia. Con el objetivo de mejorar la fotoestabilidad y la incorporación de la riboflavina se estudió la posibilidad de incorporarla a nanopartículas. Para poder incorporar el fotosensibilizador en forma estable se preparó un derivado tetrasililado de la riboflavina, el que mantiene sus propiedades fotofísicas, fotoquímicas. En una primera etapa se sintetizó nanopartículas magnéticas que fueron caracterizadas por microscopía electrónica de transmisión. El fotosensibilizador fue incorporado haciendo reaccionar el compuesto tetrasililado con una capa de sílica con la que se recubrió la nanopartícula magnética. Se sintetizó nanopartículas de silicio, a las que se unió covalentemente el compuesto sililado de riboflavina. Las nanopartículas resultaron fotoactivas e producen efectos foto-tóxicos en células HL-60 cuando se irradian con luz azulin-vitro.
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    Photochemical reactivity of the homologous proteinsα-lactalbumin and lysozyme
    (1985) Edwards M., Ana M.; Silva S., E.
    The fluorescent behaviour and the photodynamic effect was studied in native and structurally modified lysozyme and?-lactalbumin.The Tyr residues in lysozyme and?-lactalbumin show different sensitivities to the photodynamic effect. The effect is zero in the case of Tyr from native lysozyme. In contrast, the Tyr residues in?-lactalbumin are susceptible to photooxidation, which indicates a greater degree of exposure to the solvent. The three His residues of?-lactalbumin have different degrees of exposure and show two different kinetics of photooxidation whereas the His residue of lysozyme is photooxidized with a single kinetic.Two photooxidation kinetics were obtained for the Trp residues of both native proteins, an indication that in both cases there are Trp residues that are differently exposed to the solvent. The wavelengths of maximum fluorescent emission of the Trp residues were different for the two proteins, an effect which can also be explained in terms of a difference in the environment of these residues. The modified form of these proteins emit at wavelengths longer than those of the native forms. When modified the proteins photooxidize with noticeably greater quantum yields.
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    Spectroscopic properties of hydrophobic flavin esters. A one and two-dimensional H-1-NMR and C-13-NMR study
    (2000) Edwards M., Ana M.; Saldaño Mella, Antonio Jaime; Bueno Ramírez, Claudia Alejandra; Silva Stevens, Eduardo Andrés; Alegría Núñez, Sergio Eduardo; EdwardsM., Ana M; Saldaño Mella, Antonio Jaime; Bueno Ramírez, Claudia Alejandra; Silva Stevens, Andrés Eduardo; Alegría Núñez, Sergio Eduardo