3.19 Tesis doctorado
Permanent URI for this collection
Browse
Browsing 3.19 Tesis doctorado by browse.metadata.categoria "Biología"
Now showing 1 - 3 of 3
Results Per Page
Sort Options
- ItemCambios espectrales y reactividad de homólogos de azacumarina en sistemas supramoleculares basados en ciclodextrinas y cucurbiturilos(2021) Alcázar Jiménez, Jackson José; Aliaga Miranda, Margarita Elly; Santos Blanco, José Guillermo; Pontificia Universidad Católica de Chile. Facultad de QuímicaLas ciclodextrinas (CDs) y cucurbiturilos (CBs) son moléculas anfitrionas, relativamente solubles en agua con cavidades descritas como hidrofóbicas. Aunque la polaridad en la cavidad de las CDs y CBs es similar, sus diferencias estructurales y dimensionales han producido variaciones en su funcionalidad en términos de reactividad y selectividad. En este contexto, este trabajo de investigación tiene como objetivo general, evaluar los comportamientos espectrales y la reactividad frente a la reacción de hidrólisis para una serie de aza-cumarinas sustituidas en presencia y ausencia de CDs y CBs. Para ello, cinco homólogos de 7-(dialquilamino)aza-cumarina 3-sustituidas (DAAS) fueron sintetizados y caracterizados satisfactoriamente por RMN, ESI-HRMS e IR. Luego tales sustratos fueron estudiados espectroscópicamente en solución acuosa en ausencia y presencia de β-CD, DM-β-CD, γ-CD y CB7. Los resultados mostraron, que las propiedades espectrales de las DAAS sintetizadas y sus reactividades frente a la reacción de hidrólisis pueden ser afectadas según la naturaleza del macrociclo empleado, siendo el CB7 y la DM-β-CD los macrociclos más influyentes en los resultados cinéticos de este trabajo. Entre los resultados destacan: grandes efectos batocrómicos (4500cm-1) y desactivación total de la emisión de las DAAS, atribuido a la protonación del nitrógeno heterocíclico del sustrato tras su inclusión en CB7. También destaca un aumento de hasta 5,5 veces en el rendimiento cuántico de las DAAS en presencia de DM-β-CD. En términos de reactividad, el DM-β-CD y el CB7 produjeron efectos de inhibición significativos frente a la reacción de hidrólisis en medio ácido para el DAAS de tipo base de Schiff (DMSB), con diferentes constantes de asociación 3x103 y 2x105 M-1, respectivamente. Finalmente, para dilucidar el efecto de inhibición, un estudio cinético en imino-cumarinas (IC) fue llevado a cabo, de tal manera que, un modelo cinético general para la hidrólisis ácida de iminas, en presencia de CB7, fue propuesto.
- ItemElectrodos de pasta de carbón modificados con sales de bajo punto de fusión, del tipo bis(trifluorometilsulfonil)imida de N-ferrocenil N'alquil imidazolio, y su aplicación en la detección electroquímica de dopamina(2018) Díaz Navarro, Carlos Patricio; Díaz Navarro, Carlos Patricio; Isaacs Casanova, Mauricio; Isaacs Casanova, Mauricio; Pontificia Universidad Católica de Chile. Facultad de QuímicaLa motivación de esta tesis fue el diseño de un nuevo electrodo de pasta de carbón, modificado con sales derivadas del ferroceno de bajo punto de fusión, para desarrollar un nuevo método de detección electroquímica de dopamina, y promover su implementación en lugar del método de centelleo. Esta investigación se realizó en tres etapas, la primera correspondió a la síntesis de las sales propuestas, bis (trifluorometil-sulfonil) imida de N, ferrocenilmetil N, N, N-trimetilamonio (Fc1) y bis (trifluorometil-sulfonil) imida de N’, N bis(ferrocenil-metil) imidazolio (Fc2), las cuales fueron sintetizadas con la guía de los doctores Patricio Iturriaga (Universidad de la Frontera), Guillermo Ferraudi y Alexander G. Lappin (Notre Dame University). Los compuestos organometálicos fueron sintetizados y caracterizados mediante técnicas de análisis estructural como la espectrometría de masas, la resonancia magnética nuclear de protones 1H-RMN, la espectroscopia de Infrarrojo IR, la Difracción de rayos X y el análisis elemental. La segunda etapa del proyecto correspondió a la caracterización electroquímica de las sales sintetizadas, y la fabricación de los electrodos de pasta de carbón modificados con las mismas. Éstos fueron evaluados mediante técnicas electroquímicas como voltametría cíclica, voltametría de onda cuadrada, espectroscopia de impedancia electroquímica, cronocoulombimetría y microscopia de barrido electroquímico. Se determinaron las propiedades fisicoquímicas de los electrodos y se evaluó su calidad y estabilidad como sensores electroquímicos, y se evaluaron los resultados de los microelectrodos de pasta de carbón en la detección electroquímica de dopamina. Finalmente en la tercera etapa se estableció un protocolo de detección electroquímica de dopamina utilizando los nuevos microelectrodos, se determinó que el sensor más eficiente para la detección de dopamina, en buffer de Krebs (solución utilizada para cultivo neuronal), fue el electrodo fabricado con una mezcla de aglutinante 15 % p/p Fc1 y un 85 % p/p de aceite de parafina, éste obtuvo la mejor relación señal/ruido y el menor límite de detección (0,05 µM), de esta manera, se propuso este electrodo para la aplicación final de este proyecto y promoverlo para reemplazar los métodos actualmente utilizados.
- ItemRol de triptófano y tirosina en las modificaciones oxidativas de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa inducidas por radicales peroxilo y anión radical carbonato(2022) Figueroa Alegría, Juan David; López Alarcón, Camilo Ignacio; Pontificia Universidad Católica de Chile. Escuela de QuímicaLa enzima Glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PD) cumple un rol importante en sistemas biológicos. Es la primera enzima de la ruta de las pentosas fosfato, vía fundamental para la síntesis de nucleótidos y para la producción de nicotinamida adenina dinucleótido fosfato reducido (NADPH), cofactor clave para mantener la homeostasis redox intracelular. Aunque se ha sugerido en sistemas biológicos una relación entre los niveles de especies reactivas (ERO) y la actividad de G6PD, son pocos los estudios que han investigado la oxidación de esta enzima y sus consecuencias funcionales. En el presente trabajo de tesis se planteó como hipótesis que las modificaciones oxidativas sobre G6PD, mediadas por radicales peroxilo (ROOl) y radical anión carbonato (CO3l–), dependen de la dosis de radicales y de la disponibilidad de residuos susceptibles a la oxidación. Tales procesos afectarían la actividad catalítica e inducirían cambios en la masa molecular de la proteína, con participación de Trp y Tyr en procesos de entrecruzamiento. En función de dicha hipótesis, se estudió la oxidación de aminoácidos libres (Trp y Tyr) y G6PD, con especial énfasis en la formación de especies di-Tyr, di-Trp y Tyr-Trp, como también en los mecanismos de inactivación de la enzima. Se desarrollaron metodologías por espectrometría de masas (UPLC-MS/MS) para detectar las especies entrecruzadas y se establecieron condiciones experimentales para modular la dosis de los radicales libres. Los resultados obtenidos demostraron que la exposición de Trp y Tyr a diferentes flujos radicalarios no mostró una relación con la formación de di-Tyr y di-Trp. En condiciones experimentales similares, la oxidación de G6PD se asoció con pérdida de la actividad enzimática mediante un proceso dependiente de la dosis, pero no del flujo radicalario. Se determinó una pérdida de 40% de actividad después de la incubación de la enzima con 60 mM de AAPH por 90 minutos. La inactivación de G6PD se relacionó con cambios en su contenido de estructura secundaria como también con un aumento de bolsillos hidrofóbicos. Estos fenómenos indicarían desplegamiento proteico probablemente relacionado con la oxidación de residuos específicos de Met y Trp. Esto último demostrado a través de experimentos desarrollados empleando cloramina T, un oxidante no biológico, específico de residuos de Met. Los resultados obtenidos permiten plantear que la exposición a oxidantes de G6PD conduce a la pérdida de su actividad catalítica lo que puede ser relevante a nivel celular. No obstante, se requieren nuevas investigaciones que permitan establecer, bajo condiciones celulares, la importancia de tales procesos.